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巴氏染色液如何快速染色?

日期:2019-09-17浏览:3032次

        巴氏染色液的巴氏染色法是病理切片和脱落细胞染色中较好的较常用的染色方法,该染色法不但具有显示细胞核结构清晰,分色明显,透明度好,胞浆受色鲜艳等特点,而且所染标本不易脱色,可长久保存。细胞核的主要成分是脱氧核糖核酸,其等电点为pH 1.6-2.0,当pH大于2.0时DNA带负电,能与带正电的染料阳离子结合。苏木素是染核的染料,氧化后成为氧化苏木素即苏木素红或苏木精,它的等离子点是PH 6.5,当染液的酸碱度调节到PH 2.2-2.9时,苏木精能析出阳离子,与带负电的DNA结合。因为苏木精阳离子电荷不强,与DNA结合不牢,所以染色不深。当加入钾矾等媒剂后,即结合成带强正电的大分子带色体——苏木精矾,后者具有强大亲和力,与DNA结合牢固,染成较深紫色,不易为醇、水洗脱。细胞浆中的蛋白质等电点约为PH 6.0,在不同的酸碱度中能与不同的染料结合。但在PH小于4时便不能再与染料的阳离子结合;PH大于8时便不再与染料的阴离子结合。伊红、亮绿、桔黄、俾士麦棕的发色部分都是阴离子,只能与蛋白质的阳离子结合,因此染色环境不能太酸太碱。较年轻的细胞如底层鳞状上皮细胞浆中核蛋白体较多,易与亮绿结合而染绿色。成熟的细胞浆中含核蛋白体较少(如成熟红细胞、表层角化鳞状上皮细胞)易与伊红结合而染红色。很衰老的细胞(如完全角化细胞)则可与桔黄结合而呈桔黄色。
  巴氏染色液快速染色的具体实施方式:
  本实施例巴氏染色液是由细胞核染色液和细胞浆染色液构成;
  1.细胞核染色液的配制:
  2.将0.3g苏木素色精单独溶解于30ml无水乙醇中得苏木素酒精液;将硫酸铝铵6g置于1000ml大烧杯中加蒸馏水700ml,加热至70-80℃,搅拌使其完全溶解,然后加温至
  90℃,关断热源即加入苏木素酒精液,边加边搅拌,加完之后继续加热至沸即离开热源;再向其中加入0.5g黄色HgO粉末,边加边搅拌,继续加热使溶液经目测呈深紫色,立即置于10-30℃的水中进行水浴冷却;冷却到10-30℃后置于塑料桶中,加入体积百分比为1%冰乙酸2ml,经滤纸滤去残渣即得细胞核染色液,避光保存;冰乙酸的加入能稳定苏木素染色团抗拒氧化,使不过染,也减少沉淀形成;
  3.细胞浆染色液的配制:
  4.取0.1g橙黄G6溶于100ml、体积百分比为95%的酒精得橙黄G6酒精液为备用料;
  5.取0.1g亮绿溶于100ml、体积百分比为95%的酒精得亮绿酒精液为备用料;
  6.取0.05g俾仕麦棕溶于100ml、体积百分比为95%的酒精得俾仕麦棕酒精液为备用料;
  7.取0.1g伊红溶于100ml、体积百分比为95%的酒精得伊红酒精液为备用料;
  8.取磷钨酸0.5g为备用料;
  9.所有备用料充分混匀溶解后即为细胞浆染色液。
  10.利用以上过程制备的巴氏染色液的快速染色方法是在22℃的室温环境下按如下步骤进行操作:
  a、固定:将未干的宫颈分泌物涂片置体积百分比为95%的酒精中,15-30分钟时取出得固定涂片;
  b、染核:将步骤a所得固定涂片置于细胞核染色液中染色2分钟,取出后用蒸馏水冲净得染核涂片,立即进行下一步骤的染浆;
  c、染浆:将染核涂片置于细胞浆染色液中,2分钟取出,先后在两缸体积百分比为95%的酒精液中洗涤至无细胞浆染色液附着即得染浆涂片,染浆涂片即可用于进行镜检;
  若需要长期保存则继续进行后续步骤d的封片;
  d、封片:将步骤c所得染浆涂片置于无水酒精中洗涤后,再先后置于两缸AR级二甲苯洗涤透明涂片;用阿拉伯树胶封固透明涂片,被封固的透明涂片在10-30℃避光条件下保存。

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