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化学发光试剂的发表

日期:2016-11-17浏览:778次

 化学发光试剂科学理论发展观,核心讲解.原理:辣根过氧化酶使试剂中的发光物(Luminol)氧化并发光,而试剂中含有增强剂这使得发光增强了1000倍。在免疫印迹中,将复杂的蛋白混合物经SDS-PAGE分离,并转移到固相膜上(如NC、PVDF)等,用于免疫学检测,经HRP标记的抗体与膜上的蛋白直接(标记一抗)或间接(标记二抗)反应。当加入免疫印迹化学发光试剂后,Luminol发生氧化降解,并发射波长为428nm的光,此光可经X光胶片(放射自显影片)感光记录下来。
 化学发光试剂使用方法,印迹膜制备,按常规方法完成SDS-PAGE和电转膜操作,适当的封闭非常重要。可以通过标记一抗或二抗的手段引入HRP,一般采用市售的HRP二抗交联物。仔细地淋洗对于降低背景非常重要,在与HRP交联物温育后,膜片更需仔细洗涤,所有步骤均在室温下完成。
 化学发光试剂的配置,在使用前等量混合A液和B液,混合后尽快使用。将膜片置混合液中于室温下振荡温育2分钟,每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆盖全膜片。蛋白信号显现,用平头镊钳住膜片,垂直置于吸水纸以吸去过量试剂。置膜片于二层保鲜膜之间,小心赶尽气泡。将膜片吸附蛋白面朝上,置于X光片盒中。于暗室中压上X光片。根据信号的强弱适当调整曝光时间,一般为1min或5min,也可选择不同时间多次压片,以达*效果.创造奇迹,更好未来.

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