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化学发光试剂*技术

日期:2016-08-23浏览:817次

 技术,不一样的神话.化学发光试剂,将印迹膜置于封闭液中,室温轻轻震荡20-60min,以封闭掉非特异性位点。
弃去封闭液,加入适量的一抗溶液,于摇床上轻轻震荡1h。(也可将印迹膜与一抗在2-8°C条件下孵育过夜。)将印迹膜于洗脱液中悬浮清洗5min以上,并更换洗脱液4-6次。将印迹膜与适量的HRP-结合物置于摇床上轻轻震荡,室温孵育1h。重复步骤3以去除未结合的HRP-结合物.将A液和B液以1:1混合即得到超敏ECL化学发光工作液,推荐使用量为0.1mL/cm2。将工作液与印迹膜于室温孵育5min。将膜从工作液中取出,并用吸水纸吸去多余的液体,置于两层干净的保鲜膜之间,小心挤出印迹膜与保鲜膜之间的气泡。将印迹膜置于暗盒中,蛋白面朝上,于暗室中进行X-光胶片曝光。建议曝光时间为60s,进而通过调整曝光时间获得较好的实验结果。
  化学发光试剂,增强型化学发光底物能检测抗体以及Western blot或ELISA标签中的HRP活性。
经济性与同类化学发光底物相比花费更少。pg级灵敏性,高灵敏性能快速检测更广泛的蛋白范围。信号稳定.发光时间长,能进行多次曝光.信号强.发光信号比普通的以鲁米诺为基础的HRP检测体系强两倍以上.工作液稳定性高.工作液室温稳定存放8小时;试剂盒能在室温下保存一年。节约抗体,需要更少(稀释更多)的一抗和二抗.校正曲线范围广.校正曲线的范围从4.00–8000pg,R2为0.992。
   化学发光试剂注意事项.勿将超敏ECL化学发光工作液暴露在阳光或强光下,否则会导致其失活。建议将工作液保存在棕色瓶中,并避免长时间暴露在阳光下,实验室光照对工作液影响不大。使用生物素/亲和素体系时,避免使用脱脂奶粉作为封闭液,因为脱脂奶粉中含有多种内源性生物素,容易产生非特异性信号。使用充足的洗涤缓冲液、封闭液、抗体稀释液和底物工作液去覆盖印迹膜,以确保印迹膜处于湿润状态。使用大量的封闭液和洗涤液能减少非特异性信号的产生。叠氮钠是HRP酶的抑制剂,会对反应体系产生干扰,因此缓冲液中应避免使用叠氮钠做为防腐剂。印迹膜与ECL化学发光工作液孵育后5-30min内的发出的荧光是zui强的,随后荧光会随着时间的延长减弱。蛋白点荧光较弱时可以适当延长曝光时间。更多相关知识,请咨询本公司.

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