欢迎访问三明市和众生物技术有限公司网站

返回首页|联系我们

全国统一服务热线:

0598-8297899
新闻资讯您当前的位置:首页 > 新闻资讯 > 化学发光试剂的作用

化学发光试剂的作用

日期:2016-08-02浏览:1604次

 三明市和众生物技术有限公司欢迎您的浏览.化学发光试剂用途:本试剂是非放射性发光系统,用于检测固定在膜上的蛋白,其敏感性达1-5pg。用X光片可快速地获得*的硬拷贝结果。所含独特的底物足以维持12小时以上的发光,便于反复曝光操作,免疫印迹膜经抗体脱卸处理后可供再次抗体探查使用。适用于痕量蛋白或核酸检测。特别节省抗体(一抗1:500-1:5000,二抗1:3000-1:10000)。
  化学发光试剂原理:辣根过氧化酶使试剂中的发光物(Luminol)氧化并发光,而试剂中含有增强剂这使得发光增强了1000倍。在免疫印迹中,将复杂的蛋白混合物经SDS-PAGE分离,并转移到固相膜上(如NC、PVDF)等,用于免疫学检测,经HRP标记的抗体与膜上的蛋白直接(标记一抗)或间接(标记二抗)反应。当加入免疫印迹化学发光试剂后,Luminol发生氧化降解,并发射波长为428nm的光,此光可经X光胶片(放射自显影片)感光记录下来。
  化学发光试剂使用方法: 印迹膜制备 按常规方法完成SDS-PAGE和电转膜操作,适当的封闭非常重要。可以通过标记一抗或二抗的手段引入HRP,一般采用市售的HRP二抗交联物。仔细地淋洗对于降低背景非常重要,在与HRP交联物温育后,膜片更需仔细洗涤,所有步骤均在室温下完成。
  化学发光试剂的配置 在使用前等量混合A液和B液,混合后尽快使用。将膜片置混合液中于室温下振荡温育2分钟,每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆盖全膜片。蛋白信号显现,用平头镊钳住膜片,垂直置于吸水纸以吸去过量试剂。置膜片于二层保鲜膜之间,小心赶尽气泡。将膜片吸附蛋白面朝上,置于X光片盒中。于暗室中压上X光片。根据信号的强弱适当调整曝光时间,一般为1min或5min,也可选择不同时间多次压片,以达*效果。显影冲洗。调节曝光时间,再次曝光显影。膜的重复使用:配置62.5mM Tris-Hcl,PH6.7,2%SDS, 7ml/100ml的巯基乙醇的溶液,膜放入后,70?C振荡水浴30分钟。再用TBST或PBST缓冲液洗脱,zui后用BSA(牛血清白蛋白)或牛奶封闭。
  化学发光试剂操作注意:本试剂每个批号均独立优化,请不要混用或稀释本试剂以免降低敏感性;加入一抗后膜不能再干燥;适当地封闭和洗涤膜片至关重要;使用前配置化学发光试剂,配置足够覆盖膜片即可,弃去使用过的混合试剂;使用干净取样头取用每种试剂; *张片子建议曝光1分钟,观察结果后判断*曝光时间可从30秒至2小时不等;除了放射自显影片曝光和洗片处理外,所有步骤均不必在暗室中操作;膜片可经适当方法洗脱原有抗体,再次印迹使用,在此情况下,此试剂更为理想;因为它不象生色物质需要从膜片上清除底物。NaN3能抑制HRP活性,应避免使用NaN3。本公司因为专业,所以*.

上一篇:巴氏染色液厂家

下一篇:巴氏染色液的详细介绍

在线客服 联系方式 二维码

服务热线

13906088655

扫一扫,关注我们

扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站