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斑贴试验的规范步骤技巧学习一下

更新时间:2023-03-28浏览:346次

  斑贴试验是一种常用的实验方法,主要用于鉴定细菌的血清学分类和鉴别。在斑贴试验中,通过将一种特定的血清涂在细菌表面上,观察细菌与血清反应的情况,来推测细菌的种类和特性。本文将详细介绍其步骤。
 
  一、实验器材
 
  首先需要准备的是实验器材。主要有以下几种:
 
  1.试管:用于悬浮细菌。
 
  2.离心管:用于进行离心。
 
  3.离心机:用于离心。
 
  4.滴定针:用于取样。
 
  5.试验板:用于固定细菌。
 
  6.无毒性普鲁士蓝盐酸盐:用于检测斑点。
 
  7.脱氧胆酸:可使细菌细胞壁破裂,释放抗原。
 
  8.磷缓冲液:用于稀释抗原和血清。
 
  9.乳化器:用于使血清与抗原混合。
 
  10.洗涤缓冲液:用于清洗试验板。
 
  11.组织块刀:用于切取细菌。
 
  二、实验步骤
 
  1.准备工作
 
  a.准备细菌液:用荧光显微镜检测活菌及其肿胀度,将细菌悬浮在磷缓冲液中,摇匀后离心,取上清液。
 
  b.制备抗原液:将细菌取上清液和脱氧胆酸混合,振荡。
 
  c.制备血清液:从鉴定正常动物、正常人或鉴定过该种病菌的患者的全血中,经离心制成的肿胀度合适的血清。
 
  注:处理时注意消毒,防止污染。
 
  2.制备孔板
 
  取一张孔板,加入一个滴定单位(约30微升)的抗原液到每个孔中,等孔板干燥好。
 
  3.孔板实验
 
  a.采用或制备的抗血清,加入各个孔中,干燥后在37℃温箱中孵育。
 
  b.在隔夜培养的试验菌中,PDA或NA培养基上切取一枚直径约2毫米细菌菌落,用滴定针在孔中放入一滴解胶体滴定溶液,压在菌落上压一下。
 
  c.将孔板保持在水平面上,用细胞培养箱中备好的恒温环境下,孵育24小时。
 
  d.将孔板用无毒性普鲁士蓝盐酸盐染色,观察每个孔的反应情况。
 
  4.结果判定
 
  反应阴性的孔,一个小的斑贴点也没有,可认定此菌株不与该抗血清反应。
 
  反应阳性的孔,有一个小的斑贴点出现,应当作为深入研究的对象。
 
  总之,斑贴试验是一种非常重要的实验方法,可用于确定细菌种类和特性,从而指导临床治疗和疾病控制。实验步骤简单,但是需要注意消毒卫生和实验器材的准备工作,以获得准确、可靠的实验结果。

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