斑贴试验的规范步骤技巧学习一下

　　斑贴试验是一种常用的实验方法，主要用于鉴定细菌的血清学分类和鉴别。在斑贴试验中，通过将一种特定的血清涂在细菌表面上，观察细菌与血清反应的情况，来推测细菌的种类和特性。本文将详细介绍其步骤。
 

　　一、实验器材
 

　　首先需要准备的是实验器材。主要有以下几种：
 

　　1.试管：用于悬浮细菌。
 

　　2.离心管：用于进行离心。
 

　　3.离心机：用于离心。
 

　　4.滴定针：用于取样。
 

　　5.试验板：用于固定细菌。
 

　　6.无毒性普鲁士蓝盐酸盐：用于检测斑点。
 

　　7.脱氧胆酸：可使细菌细胞壁破裂，释放抗原。
 

　　8.磷缓冲液：用于稀释抗原和血清。
 

　　9.乳化器：用于使血清与抗原混合。
 

　　10.洗涤缓冲液：用于清洗试验板。
 

　　11.组织块刀：用于切取细菌。
 

　　二、实验步骤
 

　　1.准备工作
 

　　a.准备细菌液：用荧光显微镜检测活菌及其肿胀度，将细菌悬浮在磷缓冲液中，摇匀后离心，取上清液。
 

　　b.制备抗原液：将细菌取上清液和脱氧胆酸混合，振荡。
 

　　c.制备血清液：从鉴定正常动物、正常人或鉴定过该种病菌的患者的全血中，经离心制成的肿胀度合适的血清。
 

　　注：处理时注意消毒，防止污染。
 

　　2.制备孔板
 

　　取一张孔板，加入一个滴定单位(约30微升)的抗原液到每个孔中，等孔板干燥好。
 

　　3.孔板实验
 

　　a.采用或制备的抗血清，加入各个孔中，干燥后在37℃温箱中孵育。
 

　　b.在隔夜培养的试验菌中，PDA或NA培养基上切取一枚直径约2毫米细菌菌落，用滴定针在孔中放入一滴解胶体滴定溶液，压在菌落上压一下。
 

　　c.将孔板保持在水平面上，用细胞培养箱中备好的恒温环境下，孵育24小时。
 

　　d.将孔板用无毒性普鲁士蓝盐酸盐染色，观察每个孔的反应情况。
 

　　4.结果判定
 

　　反应阴性的孔，一个小的斑贴点也没有，可认定此菌株不与该抗血清反应。
 

　　反应阳性的孔，有一个小的斑贴点出现，应当作为深入研究的对象。
 

　　总之，斑贴试验是一种非常重要的实验方法，可用于确定细菌种类和特性，从而指导临床治疗和疾病控制。实验步骤简单，但是需要注意消毒卫生和实验器材的准备工作，以获得准确、可靠的实验结果。